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物料毒化预防仓贮病害合理化应对研讨
发布时间:2012-02-16        浏览次数:413        返回列表
 

  实验方法毒力测定方法采用饲料拌药法:称取饲料小麦100g于500ml广口瓶内,分别以5.0、2.5、1.5、1.25、0.5、0.1gΠkg的剂量均匀拌入饲料中,以正己烷为溶剂并设对照,每个处理设三个重复。

  每瓶内投入米象成虫各50头,用白布扎住瓶口,放置养虫恒温箱内饲养14天后,检查每瓶中的死亡数,计算死亡率及校正死亡率。

  校正死亡率(%)=处理组死亡率-对照组死亡率1-对照组死亡率×100%11312大柱初分在前期工作中,作者曾以正己烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水等不同溶剂来萃取狼毒根乙醇浸膏,分别测其毒力,发现以正己烷萃取液毒力*高。在0.5gΠkg的剂量下,其对米象的校正死亡率高达98.44%,故本实验以正己烷萃取液作为上柱初样品。

  大柱初分固定相为硅胶H,流动相为正己烷2乙酸乙酯(10∶1),柱径8cm,常规湿法装柱,硅胶高度约12cm.每次上样量为20g,流速5mlΠmin,分三段收集得段Ⅰ、段Ⅱ、段Ⅲ。各段用自制薄层板检测并分别测其毒力。以毒力较强的段Ⅲ作为下一级柱层析起始样品进一步细分。

  中柱细分固定相为硅胶H,柱径5cm,流动相为正己烷2乙酸乙酯(8∶1),常规湿法装柱,每次上样量为4g左右,流速2mlΠmin.分部收集,旋转蒸发浓缩,薄层检测,合并相同部分得7个流分,分别检测其毒力,以毒力*强的段Ⅴ作为下一步起始样品进一步细分。

  小柱纯化由于段Ⅴ经薄层检测,仍含3条谱带,故进一步上小柱细分。固定相为硅胶H,柱径3cm,流动相为正己烷2乙酸乙酯(3∶1),常规湿法装柱,每次上样量为2g左右,分部收集,薄层跟踪检测,浓缩合并相同流分,得一活性较高的样品,并检测其毒力。

  样品HPLC分析采用反相HPLC,固定相为C18柱,流动相为甲醇2水(1∶9),进样量10μl,流速1mlmin-1。

  结果与讨论大柱初分组分毒杀活性及薄层检测大柱初分得三个流分,即段Ⅰ、段Ⅱ、段Ⅲ,分别进行薄层分析,如所示。并检测其毒力,结果见。从可知,段Ⅰ约含3条谱带,段Ⅱ约含5条谱带,段Ⅲ约含6~7条谱带。有些谱带为白亮色是样品在紫外灯下呈荧光所致,有些为黑色是样品在紫外灯下为暗吸收带所致。从可知,段Ⅲ杀虫效果*好,在0.5gΠkg的剂量下,仍高达92.5%的致死率,故将段Ⅲ进一步上柱细分。

  活性*强的组分集中在Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ三个流分中,其中Ⅴ流分毒力*强,故将段Ⅴ进一步细分,以期获得活性较高的物质。小柱细分样品样活性及薄层检测第Ⅴ段流分经薄层检测仍约含3条谱带,故经小柱进一步细分,获得单一谱带纯样品,薄层检测结果如所示。并检测其毒杀活性。

  在0.625gΠkg的剂量下,其校正死亡率达43.4%,为所要寻找的毒力较高的化合物。经HPLC反相层析分析,该样品为单峰。表明通过本实验的研究,已获得显示杀虫活性较高的一色谱纯样品,为下一阶段进行新农药研制奠定了基础。

  以正己烷萃取液为初品,对瑞香狼毒根进行柱层析分离纯化,在大柱初分三个流分中,段Ⅲ效果*好。段Ⅲ中柱细分得7个流分,经活性测试,发现段Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ效果较理想,选效果*好的段Ⅴ进一步分离纯化得一纯样品,经活性测试,其在2.5gΠkg的剂量下死亡率达83.9%,为一活性较高的化合物。为新农药的进一步创制奠定了基础。

  从纯样的活性测试发现,纯样的致米象死亡率反不如正己烷萃取液、大柱初分、中柱细分*高活性的组分致死亡率高。估计是粗样中较多化合物的协同作用,将其分离提纯后,其协同效应消失,效果反而不好。其有关作用机制有待于进一步研究。